中国莱姆病螺旋体鞭毛蛋白中央区的基因克隆和表达

• 作者: 万康林 吕冰
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 莱姆病螺旋体 鞭毛蛋白 克隆表达
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 611-614
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4221字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.08.007

摘要

目的对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因种参照菌株PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因进行克隆表达,对重组鞭毛蛋白作为莱姆病血清学诊断抗原进行初步的研究,并进行基因序列和氨基酸序列分析.方法设计引物,用PCR技术获得PD91的鞭毛蛋白中央区的编码基因片段,经酶切、连接,插入质粒pET-30a中,构成重组质粒pET30a-mfla,转化到大肠杆菌BL21,提取质粒进行酶切、DNA测序和氨基酸序列分析鉴定,诱导表达,筛选高效表达株,应用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白及其抗原性.结果成功地获得了鞭毛蛋白中央区的编码基因片段和基因重组,重组蛋白在宿主菌BL21中高效表达.Western blot结果显示重组鞭毛蛋白的中央区与PD91的鞭毛蛋白具有相同的抗原性.经测序显示该中央区基因片段为鞭毛蛋白基因的409～786bp,与北美莱姆病螺旋体标准株B31的DNA碱基序列比较分析,同源性92%.结论成功地对中国莱姆病螺旋体Borrelia garinii基因种的鞭毛蛋白中央区进行了克隆表达,并证实具有抗原性,为我国莱姆病血清学诊断研究提供资料.