人血管内皮生长因子(VEGF165)在大肠杆菌中的表达及鉴定

• 作者: 余细勇 刘媛 单志新 杨敏 林曙光 林秋雄 符永恒 谭虹虹
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 血管内皮生长因子 克隆,分子 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（z1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 23-25
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2004.z1.108

摘要

[目的]克隆人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达、纯化重组VEGF165(rVEGF165)蛋白.[方法]用PCR技术,从人心脏cDNA文库中扩增VEGF165cDNA,并定向克隆入原核表达载体pET-28a中.用IPTG诱导VEGF165在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用HisTrap亲合层析柱纯化重组rVEGF165,Western-blot鉴定.根据人VEGF165的促血管内皮细胞增殖的特性,用MTT法检测重组VEGF165的生物学活性.[结果]从人心脏cDNA文库中扩增出VEGF165cDNA片段.克隆的VEGF165cDNA长576bp,编码191个氨基酸残基,序列与文献报道一致.SDS-PAGE电泳显示,经IPTG诱导,高效表达出25ku的rVEGF165,主要存在于包涵体中,约占菌体总蛋白的20%.MTT检测显示,复性后的rVEGF165能呈剂量依赖性地促进脐静脉血管内皮细胞增殖.[结论]克隆、测定了人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出rVEGF165.