金银花nrDNA ITS区聚合酶链反应条件的研究

• 作者: 李娟 李萍 王冲之
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 金银花 nrDNA ITS区 高G+C含量 PCR扩增 反应条件优化
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 303-306
• 页数: 4页
• 分类号: R917
• 字数: 3211字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5048.2004.04.004

摘要

目的:金银花nrDNA ITS区序列G+C含量为68%,用常规的PCR方法扩增效果差.本研究通过改变扩增程序及使用改性剂的方法显著提高了金银花nrDNA ITS区的扩增效率.方法:分别从金银花叶及药材中提取总DNA,通过优化扩增条件,对nrDNA ITS区进行扩增,并比较了两种优化方法的差别及适应性.方法1:提高变性温度至97℃;方法2:添加混合改性剂(DMSO 4%-甘油10%).结果:与方法1相比,方法2可降低变性温度5 ℃,升高退火温度9 ℃,降低镁离子浓度至0.5 mmol/L,降低Taq DNA聚合酶用量至0.1 U(30 μl体系),PCR产物量显著提高,且可消除植物DNA粗提物中杂质的干扰.结论:通过提高退火温度及添加改性剂可克服高G+C含量金银花nrDNA ITS区序列扩增的困难,该方法的建立有助于解决植物来源DNA模板的PCR扩增问题.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李萍	中国药科大学现代中药重点实验室	270	6506	44.0	66.0
2	李娟	中国药科大学现代中药重点实验室	66	585	12.0	22.0
3	王冲之	中国药科大学现代中药重点实验室	4	196	4.0	4.0