来源于蓝藻、铜绿微囊藻的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因的克隆和鉴定

• 作者: 宋立荣 雷腊梅
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 微囊藻 尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶 TAIL-PCR 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 分子与发育生物学
• 页码范围: 1373-1382
• 页数: 10页
• 分类号: Q943
• 字数: 711字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2004.11.015

摘要

以已知的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因的保守区为基础,自行设计一对简并引物,该对引物从形成水华的蓝藻(Synechocystis PCC6803)铜绿微囊藻FACHB 905株(Microcystis aeruginosa FACHB 905)的基因组DNA中扩增到一个476 bp的DNA片段.通过TAIL-PCR和连接介导的PCR两种方法分离该片段的侧翼序列,最后得到大小约2.5 kb的DNA片段.序列分析揭示其中有一个编码462个氨基酸的开放阅读框,我们将此开放阅读框对应的蛋白命名为Mud.该Mud蛋白的氨基酸序列与蓝藻(73%相同,87%相似)和细菌(Bacillus subtilis)(51%相同,67%相似)的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶氨基酸序列表现高度的同源性.将该mud基因克隆于p-GEX-4T-1融合表达载体并在大肠杆菌中表达GST-Mud融合蛋白,经过酶活力测定发现,GST-Mud蛋白具有一定的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶活性.用抗GST-Mud蛋白的多抗对M.aeruginosa FACHB 905的胞质蛋白组分进行Western印迹分析,结果显示一条分子量大小约49 kD的专一条带,这个分子量与从基因推断出的蛋白分子量大小基本一致.综上所述,我们认为从微囊藻克隆到的Mud蛋白基因是尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因,该酶在其他生物如植物和细菌中参与多糖合成,是多糖合成的关键酶之一,而在藻类中对尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶开展研究却是首次报道.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋立荣	中国科学院水生生物研究所	167	3487	32.0	52.0
2	雷腊梅	中国科学院水生生物研究所	9	270	6.0	9.0