红麻6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PDGH)基因克隆及RNAi载体构建

• 作者: 余明丽 冉珊敏 周瑞阳 明庭会 赵艳红 钱景华 陈鹏 黄志鹏
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 红麻花药 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 基因克隆 载体构建
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 2110-2116
• 页数: 7页
• 分类号: S563.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.12.2110

摘要

[目的]克隆红麻不育系和保持系6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PDGH)基因,并构建其RNAi载体,为进一步研究其在红麻花药发育中的功能奠定基础.[方法]根据红麻花药转录组高通量测序数据结果和生物信息学方法获得6PDGH基因全长cDNA拼接序列,分别以红麻不育系(P3A)和保持系(P3B)的花药反转录cDNA及总DNA为模板克隆红麻6PGDH基因全长.依据RNAi载体设计原则,选取红麻6PGDH基因cDNA序列中段389bp的特异片段做为RNA干扰片段,构建红麻6PGDH因的RNAi载体.[结果]克隆获得的红麻不育系(P3A)和保持系(P3B)花药6PGDH基因全长均为1751 bp,均包含1458bp的开放阅读框,编码485个氨基酸残基,无内含子;其碱基序列在不育系和保持系中仅存在两个碱基差异.该基因氨基酸序列(GenBank登录号KF964027)与拟南芥、玉米、大豆、苜蓿、三角叶杨、蓖麻的6PDGH同源性分别为75.07％、84.57％、86.50％、87.24％、91.19％和92.01％.成功构建了红麻6PGDH基因的RNAi载体,获得了干扰表达载体pART27-pKANNIBAL-R1+2.[结论]成功克隆获得红麻6PGDH基因全长序列,构建的干扰表达载体可用于红麻6PGDH基因的功能研究.