应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒e抗原调节基因

• 作者: 党晓燕 刘妍 徐志强 成军 杨倩 王建军 王春花 纪冬
• 来源期刊: 胃肠病学和肝病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒e抗原 基因
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: R512.62
• 字数: 3565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2004.01.004

摘要

目的筛选与克隆HBeAg激活基因,了解其在体内的凋节功能线索.方法以HBeAg表达质粒pcDNA3.1(-)-HBeAg转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染人肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果成功构建人HBeAg激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到40个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～800 bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得12种编码基因,包括11种已知基因和1种未知基因.结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及物质代谢密切相关的蛋白编码基因,推测了HBeAg在体内可能存在的调控机制的线索,尚需进一步的实验证明.