应用抑制性消减杂交技术筛选HBxAg蛋白结合蛋白XBP1的上调基因

• 作者: 刘小静 张树林 成军 樊万虎 王琦
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: XBP1基因 HepG2细胞 抑制性消减杂交技术 反式调节
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 671-675
• 分类号: R575.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8259.2012.06.002

摘要

目的 应用酵母双杂交及生物信息学(bioinformatics)技术获得HBxAg蛋白结合蛋白XBP1,为了解该基因的反式调节机制,利用抑制性消减杂交技术筛选并克隆XBP1蛋白反式激活的靶基因.方法 以XBP1表达质粒pcD-NA3.1(-)-myc-his(A)-XBP1转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)-myc-his(A)为对照；制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次PCR反应,产物与T/A克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析.结果 成功构建人XBP1蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA.扩增后得到80个200～1 000 bp插入片段的克隆,随机挑选其中30个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得28个已知编码序列基因和2个未知的新基因.结论 XBP1在肝细胞内表达后能够上调HepG2细胞中许多不同基因表达的变化,这些基因与细胞信号转导、细胞增殖与分化、免疫应答、能量代谢、细胞凋亡、肿瘤发生等生物过程密切相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
2	张树林	西安交通大学医学院第一附属医院感染科	76	619	13.0	23.0
3	刘小静	西安交通大学医学院第一附属医院感染科	34	53	4.0	5.0
4	王琦	北京地坛医院传染病研究所	29	36	3.0	4.0
5	樊万虎	西安交通大学医学院第一附属医院感染科	16	59	3.0	7.0