应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因

• 作者: 刘妍 成军 李克 李莉 段惠娟 王刚
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎,丙型 病毒核心蛋白质类 反式激活 消减杂交
• 年，卷（期）: 2001,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 880-883
• 页数: 4页
• 分类号: R512.6|R342.75
• 字数: 3241字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2001.12.007

摘要

应用抑制性消减杂技术构建丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCV核心蛋白反式激活相关基因.以HCV核心表达质粒pcDNA3.1(-)-core转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果显示,成功构建人HCV核心蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到233个白色克隆,进行菌落PCR分析,其中213个均得到100～1 000 bp插入片段.挑取63个插入片段测序分析,其中6个cDNA片段为未知序列,通过生物信息学分析获得其全长序列,已被GenBank收录.提示6个新的cDNA全长序列,可能是HCV核心蛋白反式激活靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李莉		153	600	11.0	19.0
2	成军		117	1347	20.0	31.0
3	刘妍		62	535	12.0	21.0
4	王刚		97	707	15.0	23.0
5	李克		28	234	7.0	15.0
6	段惠娟		22	182	5.0	13.0