丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5B反式激活基因的克隆化研究

• 作者: 刘妍 张黎颖 成军 王志凌 白桂芹 纪冬
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: C型肝炎样病毒属 病毒非结构蛋白质类 反式激活(遗传学)
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 413-415
• 页数: 3页
• 分类号: R373.21
• 字数: 2369字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1139.2005.06.005

摘要

目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白5B(HCV NS5B)转染细胞差异表达cDNA消减文库,克隆HCV NS5B蛋白反式激活相关基因.方法:以HCV NS5B表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5B转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交(SSH)分析.随机挑取克隆进行测序及同源性分析.结果:文库扩增后得到35个阳性克隆,经菌落PCR分析显示其中26个克隆含有大小不等的200～1000 bp插入片段.测序及同源性分析,显示16种已知基因编码蛋白和1种未知功能基因序列,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因,可能是NS5B反式激活靶基因.结论:成功构建了HCV NS5B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HCV NS5B反式调节的靶基因在肝炎、肝纤维化和肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据.