丙型肝炎病毒非结构蛋白4A反式激活基因NS4ATP1的克隆化研究

• 作者: 严福明 刘妍 吴顺华 崔玉芳 张玲霞 张黎颖 成军 纪冬
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎 丙型 病毒非结构蛋白质类 反式激活(遗传学)
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 380-382
• 页数: 3页
• 分类号: R373.21
• 字数: 2178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1139.2005.05.026

摘要

目的:筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A)反式激活新型靶基因.方法:以HCV NS4A蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-NS4A转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析.分析筛选得到的克隆,其中之一与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,通过序列同源性比对和电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从转染pcDNA3.1(-)-NS4A的HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并对克隆的基因及其编码产物的序列进行分析.结果:该新基因的编码序列全长为963个核苷酸(nt),编码产物由321个氨基酸残基(aa)组成,并测序证实,命名为NS4ATP1,在GenBank中注册,注册号为AY 740521.结论: 分子生物学技术与生物信息学技术相结合,发现并鉴定、克隆了HCV非结构蛋白反式激活作用的新型靶基因NS4ATP1,为进一步研究HCV非结构蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.