乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP4的克隆化研究

• 作者: 党晓燕 刘妍 张玲霞 成军 杨倩 王建军 王春花 纪冬
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 X蛋白 反式激活 基因克隆化
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 380-382
• 页数: 3页
• 分类号: R512.63
• 字数: 2645字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.05.003

摘要

目的筛选并克隆乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)反式激活新型靶基因.方法以HBxAg表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析,应用生物信息学方法对所获基因片段序列进行分析发现,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索、比对和电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从转染了pcDNA3.1(-)-X的HepG2细胞提取总RNA,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增,获得阳性克隆之后,进行鉴定并对克隆的基因及其编码产物的序列进行分析.结果该新基因的编码序列全长为348个核苷酸(nt),编码产物由116个氨基酸残基(aa)组成,并测序证实,命名为XTP4,在GenBank中注册,注册号为AF490253.结论通过分子生物学技术与生物信息学技术的结合,发现并鉴定、克隆HBxAg反式激活作用的新型靶基因XTP4,为进一步研究HBxAg反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.