抑制性消减杂交技术筛选XTP4蛋白反式调节基因

• 作者: 刘妍 吴勤 成军 朱传琳 李莉 韩萍
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,乙型 X蛋白 反式激活 抑制性消减杂交
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 887-888
• 页数: 2页
• 分类号: R512.6+3
• 字数: 2521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.10.020

摘要

目的筛选、克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP4转染肝癌细胞后的反式调节基因,探索XTP4基因表达对肝细胞基因表达谱的影响.方法常规的分子生物学技术构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XTP4,应用抑制性消减杂交(SSH)技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP4转染的HepG2细胞和空载体转染的相同细胞差异表达的mRNA进行研究,将富集的二次PCR产物与T/A载体连接,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果消减文库扩增后得到21个阳性克隆,PCR分析显示其中16个克隆含有200～1 000bp的插入片段.对插入片段进行测序及生物信息学分析,结果共获得9种蛋白编码基因.这些差异表达的基因与肝细胞纤维化形成、肿瘤发生、线粒体氧化还原代谢、细胞生长调节密切相关.结论应用SSH技术成功筛选了XTP4对肝癌细胞的反式调节基因,为进一步阐明HBxAg对肝细胞蛋白的反式调节作用提供了理论依据.