丙型肝炎病毒NS5A反式激活基因1的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 张延峰 成军 李晓光 洪源 郑铁龙
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,丙型 NS5ATP1基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 59-61
• 页数: 3页
• 分类号: R512.63|R34-33
• 字数: 3227字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2008.01.019

摘要

目的 构建丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A的反式激活蛋白1(NS5ATP1)基因的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备多克隆抗体.方法 从pGBKT7-NS5ATP1质粒上切取NS5ATP1基因,克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP1表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达.亲和镍柱层析纯化该融合蛋白后,免疫新西兰兔,获得多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价.结果 以pET32a(+)-NS5ATP1表达载体分别转化DH5α、BL21菌后,经IPTG诱导,成功获得分子量为56kD左右的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4.5h时重组蛋白的表达量最高.Western blot证实其具有良好的抗原性.用该蛋白成功免疫新西兰白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价＞1:512 000.结论 成功构建原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP1,表达纯化NS5ATP1融合蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体,为进一步的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
2	洪源	北京地坛医院传染病研究所	44	70	5.0	6.0
3	李晓光		1	3	1.0	1.0