丙型肝炎病毒NS5B基因的克隆及在大肠杆菌的分泌表达

• 作者: 张跃红 段惠娟 鞠连才
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,丙型 基因,NS5B 大肠杆菌 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 696-698
• 页数: 3页
• 分类号: R373.21
• 字数: 2453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2002.08.014

摘要

由于全长丙型肝炎病毒NS5B的疏水性,其表达和纯化非常困难.为了分泌表达NS5B, 作者对NS5B进行截短,缺失其疏水部分从而在大肠杆菌细胞中分泌表达HCV NS5B基因,并测定其活性.用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法,设计截去NS5B疏水部分, PCR引物以HCV全长质粒pBRTM/HCV-1为模板,克隆到pGEM-Teasy 载体中,双酶切后回收连接到pET-21b中表达.大肠杆菌培养上清过柱纯化,进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,并用液闪近端分析(SPA)法分析NS5B RdRp活性.成功地构建了NS5B基因大肠杆菌表达载体,Western 免疫印迹显示NS5B蛋白在大肠杆菌细胞中表达.表达产物在大肠杆菌培养上清中存在,分子量68kD左右,而且[ 3H]总掺入率达6 900cpm.NS5B蛋白在大肠杆菌上清中表达成功,经过活性测定,所表达的NS5B具有活性功能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鞠连才		6	13	3.0	3.0
2	张跃红		1	7	1.0	1.0
3	段惠娟		22	182	5.0	13.0