丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6的反式调节基因研究

• 作者: 刘妍 张玲霞 张黎颖 成军 李克 王琳 纪冬 郭江
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: C型肝炎样病毒属 病毒核心蛋白质类 抑制性消减杂交
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 46-48
• 页数: 3页
• 分类号: R373.21
• 字数: 2241字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1139.2005.01.019

摘要

目的:筛选、克隆新基因HCBP6转染肝癌细胞后的反式调节基因,探索HCBP6基因表达对肝细胞基因表达谱的影响.方法:应用酵母双杂交技术和生物信息学(bioinformatics)技术,筛选得到的人HCV核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)的基因.构建HCBP6基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCBP6,应用抑制性消减杂交技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-HCBP6转染的HepG2细胞和空载体转染的相同细胞差异表达的mRNA进行研究,将富集的二次PCR产物与T/A载体连接,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆聚合酶链反应(PCR)扩增后进行测序及同源性分析.结果:消减文库扩增后得到 30 个阳性克隆,菌落PCR分析显示,其中 24 个克隆含有200～1 000 bp插入片段.对插入片段测序,并通过生物信息学分析,结果共获得11种蛋白编码基因.结论:应用SSH技术成功筛选了HCBP6对肝癌细胞的反式调节基因,本实验结果对初步探索新基因的功能提供重要的信息,为进一步阐明HCV核心蛋白与HCBP6相互作用后的肝细胞生物大分子变化提供了理论依据.