多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析检测耐异烟肼结核分枝杆菌

• 作者: 于文彬 别良峰 张荣 程晓东 苏明权 郝晓柯
• 来源期刊: 中华结核和呼吸杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分枝杆菌,结核 异烟肼 药物耐受性 聚合酶链反应 多态现象,单链构象
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-26
• 页数: 4页
• 分类号: R52
• 字数: 3951字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1001-0939.2004.01.010

摘要

目的建立耐异烟肼(isoniazid, INH)结核分枝杆菌多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析(multiple-polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism, multi-PCR-SSCP)方法,快速、特异地同时检出aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况,用于快速诊断结核分枝杆菌对INH的耐药性.方法根据结核分枝杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用multi-PCR及SSCP技术,同时检测对结核分枝杆菌耐INH起作用的这3个基因的突变情况.结果对H37 Rv标准株、临床分离INH敏感株(23株)及INH耐药株(35株)分别采用常规PCR和multi-PCR同时进行扩增,两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段,且结果符合率达100%;采用单基因PCR-SSCP,aphC启动子序列突变检出率17%(6/35)、inhA序列突变检出率20%(7/35)、katG序列突变检出率66%(23/35);multi-PCR-SSCP突变检出率83%(29/35). 结论耐药基因检测指导治疗是一种新探索,multi-PCR-SSCP方法敏感、特异,能同时快速有效地检测结核分枝杆菌aphC启动子、inhA、katG 3个INH耐药基因的突变,提高检验效率,有望成为临床指导用药的好方法.