人胚神经干细胞分离培养与鉴定方法

• 作者: 李秀芹 王本旭 董玉环 赵亚朴 赵荣山 郝京生
• 来源期刊: 华北国防医药
• 学科: 医学
• 关键词: 神经干细胞 胚胎 细胞分离 细胞培养 生物学鉴定法
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 80-82
• 页数: 4页
• 分类号: R329.2+8
• 字数: 3073字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2004.02.002

摘要

目的:建立神经干细胞(NSCs)实验室分离、培养方法,为NSCs移植提供细胞源.方法:取4月龄(±15 天)正常孕妇水囊引产胎儿大脑纹状体区组织分离神经干细胞,培养于含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和B27的无血清培养基;同时利用单细胞克隆技术进行连续传代培养;利用形态学观察和免疫荧光技术检测神经上皮干细胞蛋白Nestin抗原的表达来鉴定神经干细胞.结果:体外培养的干细胞在bFGF和B27培养基中可不断增殖形成细胞球,并出现少量细胞分化.单细胞培养4天即开始分裂,同时伴有个别细胞分化;出现大量神经球一般为15天;分化的细胞在30天开始分解,50天左右基本消失.细胞培养3个月(每月补液1次)仍具有分裂增殖能力.单细胞克隆可连续传代10次,仍具增殖分化能力.液氮冻存6个月的细胞复苏后仍具增殖分化能力.单细胞克隆传代增殖的细胞球经Nestin免疫荧光鉴定,呈阳性结果,证实其胚胎源性.结论:采用bFGF和B27的无血清培养基能促进神经干细胞连续稳定增殖,并有少量分化,细胞体外培养3个月、克隆连续传代10次情况下的细胞仍具有神经干细胞特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李秀芹	北京军区联勤部军事医学研究所微生物检验科	92	283	8.0	12.0
2	郝京生	北京军区联勤部军事医学研究所微生物检验科	12	13	2.0	2.0
3	赵荣山	北京军区联勤部军事医学研究所微生物检验科	18	39	4.0	5.0
4	赵亚朴	白求恩军医学院病原教研室	13	43	4.0	6.0
5	王本旭	北京军区联勤部军事医学研究所微生物检验科	17	77	3.0	8.0
6	董玉环	北京军区联勤部军事医学研究所微生物检验科	2	1	1.0	1.0