弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究

• 作者: 吴少庭 张仁利 林绮萍 温见翔 潘晖榕 秦莉 翁亚彪 袁仕善 雷明军 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 抗原表位 噬菌体随机肽库 免疫筛选 免疫保护
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 685-688
• 页数: 4页
• 分类号: R382.5
• 字数: 3814字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9727.2004.05.001

摘要

目的利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位,并探讨其免疫保护效果.方法用纯化的弓形虫免疫兔血清IgG对噬菌体12肽库进行三轮筛选,对获得的日的噬菌体用间接ELISA和Dot-ELISA检测其特异性,并对其中的某些克隆进行Western-blot分析和序列测定;用混和噬菌体克隆及强阳性袁位克隆免疫BABL/c小鼠,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度,攻击感染后观察小鼠存活情况.结果经三轮筛选,特异性噬菌体得到富集,随机挑取18个克隆经间接ELISA和Dot-ELISA鉴定,有16个克隆能与弓形虫免疫兔血清lgG呈特异性反应.Western-b1ot分析显示P2克隆能被免抗弓形虫血清所识别,具有类似于弓形虫抗原的免疫原性,其序列为5'-CTTCAGTTGGATCGGGCTCCGTTTTGGAAT CAGGGT-3',与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性;与原肽库对照组相比,P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体,抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组.结论利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟表位,这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用.