弓形虫ROP16Ⅰ/ⅢDNA疫苗不能诱导小鼠有效的保护性免疫

• 作者: 周芹芝 李曼 沈继龙 罗庆礼 都建 陈鹤
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 ROP16Ⅰ/Ⅲ 分子疫苗
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1010-1016
• 页数: 7页
• 分类号: R382
• 字数: 4876字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2015.11.005

摘要

目的 利用ROP16Ⅰ/Ⅲ基因真核表达重组质粒免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠体液免疫和细胞免疫,评估ROP16Ⅰ/nⅢ作为潜在的分子疫苗的价值.方法 克隆Chinese 1型弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ,将其插入真核表达载体pEGFP-C2中构建重组质粒pEGFP-ROP16Ⅰ/Ⅲ,脂质体法转染T293细胞并观察体外表达.Western blotting分析鉴定.将36只SPF级小鼠随机均分为:①PBS组;②空质粒组;③pEGFP-ROP 16 Ⅰ/Ⅲ组.每2周肌注免疫1次(100 μg/只),共3次;于免疫前及每次肌注前1d和末次免疫后2周收集小鼠血清,间接ELISA法检测血清抗弓形虫IgG.于末次免疫2周后取小鼠脾脏,分离淋巴细胞培养测细胞因子.剩余小鼠腹腔注射Chinese 1型弓形虫Wh3株速殖子1 000个/只,观察小鼠攻击感染后的存活时间和存活率.结果 真核表达载体构建成功,体外见到重组质粒pEGFP-ROP 16Ⅰ/Ⅲ在T293细胞的表达;pEGFP-ROP 16 Ⅰ/Ⅲ末次免疫后血清中IgG水平及脾淋巴细胞细胞因子均无明显升高(P＞0.05);攻击感染后,免疫组小鼠比对照组的存活时间无延长(P＞0.05);生物信息学分析发现ROP16Ⅰ/Ⅲ缺乏线性B细胞表位.结论 Chinesel型弓形虫的ROP16Ⅰ/Ⅲ由于其分泌的定位和结构特点,不能诱导小鼠产生有效的抗Wh3株攻击感染的免疫保护.