"胰岛代理细胞"的构建:在HepG2细胞中获得胰岛素分泌

• 作者: 兰丽珍 方芳 邓华聪 郑宏庭
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 年，卷（期）: 2004,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2103-2106
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4691字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2004.09.020

摘要

目的:利用转基因技术将HepG2细胞改建为具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞".方法:以携葡萄糖激酶(glucokinase,gk)基因的逆转录病毒及携人胰岛素原基因突变体(mutant proinsulin gene,mpin)的逆转录病毒共同感染肝母细胞瘤细胞系HepG2,G418选择培养基挑选抗性细胞集落,放免法、SDSPAGE、Western-blot及反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定HepG2细胞中两个目的基因的转录及表达;选取联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞进行葡萄糖反应性胰岛素分泌的检测,以单独表达成熟胰岛素的HepG2细胞作对照.结果:在G418选择培养基中3 wk获阳性细胞克隆,采用放免法、SDS-PAGE、Western-blot从20个细胞克隆中挑选出联合表达葡萄糖激酶及成熟胰岛素的HepG2细胞4株,其中1株2个目的基因表达均较强,命名为细胞克隆"β";经RT-PCR检测证实细胞"β"中已有两个目的基因的转录.在细胞"β"中,葡萄糖浓度为0.5 mmol/L和0.75 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P＞0.05);葡萄糖浓度为2.0 mmol/L,3.0 mmol/L,4.0 mmol/L,5.0 mmol/L,及6.0 mmol/L时,胰岛素的分泌无显著性差异(P＞0.05);其余葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌差异均有显著性意义(P＜0.05).在单独表达胰岛素的HepG2细胞中,各葡萄糖浓度条件下,胰岛素的分泌均无显著性差异(P＞0.05).说明在细胞"β"中获得了葡萄糖反应性胰岛素分泌,葡萄糖浓度约1.75-2 mmol/L时出现胰岛素分泌高峰.结论:成功构建了具有生理性胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰丽珍	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	25	106	5.0	9.0
2	邓华聪	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	197	1595	19.0	31.0
3	郑宏庭	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	20	95	5.0	9.0
4	方芳	重庆医科大学附属第一医院内分泌科	29	155	8.0	12.0