EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化

• 作者: 曹孟德 秦洁 许予明 许燕 邢莹 鄢文海 陈宗德 韩雪飞 龚光明
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 脐血 间充质干细胞 神经分化 端粒酶
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 956-960
• 页数: 5页
• 分类号: R331
• 字数: 2940字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2004.06.012

摘要

目的:检测重组人表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化,以探讨人脐血MSCs的增殖性和安全性,为其临床应用提供实验和理论依据.方法:采集健康自然分娩产妇志愿捐献的脐血,密度梯度离心分离单个核细胞,接种于含体积分数为20%胎牛血清的DMEM/F12中,对照组不加细胞因子,实验组加入EGF和bFGF,终浓度均为10 μg/L,剩余细胞用液氮冻存.培养24 h后倾去全部液体以去除未贴壁细胞,以后每3 d全量换液1次.分别收集培养1 d、4 d、7 d、10 d、14 d、21 d的贴壁细胞和冻存细胞,将细胞密度调整一致,采用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测脐血MSCs培养前后各时间段的巢蛋白(nestin)和神经丝亚单位M(NF-M) mRNA表达;采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附实验(TRAP-ELISA)法检测人脐血MSCs向神经细胞分化过程中的端粒酶活性变化.结果 :RT-PCR检测发现,未培养的脐血细胞nestin、NF-M mRNA均呈阳性表达;培养后NF-M mRNA的表达随培养时间延长而增强(P<0.01); 实验组与对照组相比,细胞因子能明显促进NF-M mRNA的表达(P<0.01).而nestin mRNA的表达随培养时间延长而下降(P<0.01),至第7 d已不能检出;TRAP-ELISA法检测发现,未培养的脐血细胞端粒酶活性较高,以后随培养时间的延长而下降(P<0.01),至培养第21 d后已不能检出.实验组与对照组相比,细胞因子能延缓二者的降低趋势(P<0.01).结论:EGF和bFGF在联合诱导人脐血MSCs向神经细胞分化的过程中,能降低脐血MSCs的端粒酶活性.