IL-10基因克隆化与原核重组IL-10蛋白制备的实验研究

• 作者: 刘华 刘相萍 吕振华 杨堃 濮海平 隋爱华
• 来源期刊: 实用医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞因子 白介素-10 基因克隆化 重组蛋白 制备
• 年，卷（期）: 2004,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1092-1095
• 页数: 4页
• 分类号: R394.R3|R4
• 字数: 3617字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4008.2004.12.022

摘要

目的克隆化人IL-10基因及重组蛋白的制备为IL-10基因表达在小儿炎症性、过敏性疾病中的作用及治疗等提供有力的证据.方法采用过敏症患者发作时期的外周血,提取总RNA.以总RNA为模板,特异性引物进行反转录,RT-PCR进行IL-10基因筛选.PCR产物经酶切分析和DNA序列测定后,构建重组质粒pTrchHis2B-hIL10原核高效表达载体,通过大肠杆菌(工程菌)JM109经IPTG诱导表达重组hIL-10蛋白,并经与Ni-NTA树脂中的6×His配体结合进行亲和层析纯化,表达产物进行SDSPAGE电泳分析.结果 DNA测序显示克隆化人IL-10全长开放读框准确,表达读码框正确.SDS-PAGE 分析显示,原核表达系统表达的重组蛋白量和纯度满意.结论采用以总RNA为模板的RT-PCR一步法,能简便、可靠地获得hIL-10基因产物,所构建的原核表达载体pTrcHis2B-hIL10,能够快速、高效制备rhIL-10蛋白,为细胞因子hIL-10功能的进一步研究及临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	隋爱华	青岛大学医学院附属医院中心实验室	92	345	10.0	12.0
2	杨堃	青岛大学医学院附属医院中心实验室	59	195	8.0	11.0
3	刘相萍	青岛大学医学院附属医院中心实验室	61	180	7.0	8.0
4	吕振华	青岛大学医学院附属医院中心实验室	33	114	7.0	9.0
5	濮海平	401医院儿科	7	39	4.0	6.0
6	刘华	401医院儿科	7	33	3.0	5.0