猪链球菌2型MRP与EPF基因串联表达蛋白及其免疫保护作用

• 作者: 何孔旺 李明 陆承平
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌2型 溶菌酶释放蛋白 胞外蛋白因子 融合表达 中和表位
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 1264-1269
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 4362字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0578-1752.2005.06.030

摘要

根据猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellular protein factor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1 801~2 513位序列和epf 基因1 783~2 563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp 、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组质粒转化入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白.用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印,结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位.用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔,以最小致死量猪链球菌强毒株SS2-1攻击,兔的存活率达50%(2/4),存活率明显高于单个表达产物.证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原.