人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导的胸苷激酶基因治疗膀胱癌的实验研究

• 作者: 吴建辉 张勇 王亚轩 白志杰 蔡文清 黎玮
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 关键词: 膀胱肿瘤 癌 腺病毒 人端粒酶逆转录酶启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 229-232
• 页数: 4页
• 字数: 2917字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1000-6702.2005.04.003

摘要

目的观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)自杀基因系统体外对人膀胱癌的选择性杀伤效应. 方法利用不同感染复数(MOI)的重组腺病毒携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因感染膀胱癌细胞253J和人成纤维细胞MRC-5,荧光显微镜下观察其感染效率.利用携带不同启动子的重组腺病毒Ad-hTERT-HSV/tk以及Ad-CMV-HSV/tk感染253J和MRC-5细胞,加入不同浓度GCV,MTT法观察受染细胞的存活率. 结果重组腺病毒Ad-hTERT-EGFP能特异性转染253J细胞,其转染效率随重组病毒的MOI增加而升高(P<0.01),MOI为1时转染率为8.3%,MOI为1000时转染率达100.0%;应用GCV 处理后,Ad-CMV-HSV/tk对253J和MRC-5细胞均有杀伤作用,而Ad-hTERT-HSV/tk只杀伤253J细胞(P<0.001),随着MOI和GCV浓度增加,253J细胞存活率明显降低(P<0.01),MOI为1、GCV浓度为1μmol/L时存活率为95.4%,MOI为100、GCV浓度为1000μmol/L时存活率仅为6.1%,并有旁观者效应. 结论重组腺病毒携带EGFP报告基因可准确、简便地确定转染效率,hTERT启动子调控的重组腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统对人膀胱癌细胞有靶向杀伤作用.