用于IDDM基因治疗的rAAV2-GAD-Ig的研制

• 作者: 吴小兵 宋伦 沈倍奋 王仁喜 王建安 韩根成 黎燕
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 谷氨酸脱羧酶(GAD) GAD-Ig pSNAV-GAD-Ig rAAV2-GAD-Ig 特异性免疫耐受
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4273字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2005.01.007

摘要

目的: 构建重组真核表达载体pSNAV-GAD-Ig[GAD-Ig融合基因是由小鼠GAD(glutamic acid decarboxylase)基因插入到小鼠IgG3重链(Ig)基因的N端而成的], 制备含GAD-Ig融合基因cDNA的重组缺陷型腺相关病毒-2(rAAV2-GAD-Ig), 并探讨rAAV2所介导的GAD-Ig是否能诱导I型糖尿病(IDDM)动物模型-NOD(nonobese diabetic)小鼠产生特异性免疫耐受.方法: 从含GAD-Ig融合基因的中介载体BSSK(BSSK-GAD-Ig)中, 用PCR方法扩增目的基因片段, 并克隆入真核表达载体pSNAV 中, 构建重组真核表达载体pSNAV-GAD-Ig.以脂质体法将pSNAV-GAD-Ig转染到rAAV2包装细胞BHK-21中, 产生rAAV2-GAD-Ig.采用RT-PCR、 Western blot和ELISA法, 检测rAAV2-GAD-Ig感染的BHK-21细胞中目的基因的表达.应用GAD抗原体外诱导特异性T细胞的二次应答, 来检测rAAV2所介导的GAD-Ig是否能诱导NOD小鼠产生特异性免疫耐受.结果: GAD-Ig目的基因已整合到靶细胞的基因组中, 并能以分泌形式表达目的蛋白GAD-Ig.将rAAV2-GAD-Ig肌注后, NOD小鼠能产生特异性免疫耐受.结论: 获得了可用于NOD小鼠治疗研究的rAAV2-GAD-Ig.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈倍奋	军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室	213	1497	18.0	31.0
2	黎燕	军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室	139	930	14.0	25.0
3	宋伦	军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室	44	192	7.0	11.0
4	王建安	军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室	18	112	5.0	10.0
5	王仁喜	军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室	8	44	4.0	6.0
6	韩根成	军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室	20	157	6.0	12.0