日本血吸虫多价DNA疫苗的构建及鉴定

• 作者: D.A.Harn 何伟 司进 徐明 朱荫昌 梁幼生 殷旭仁 王晓婷 管晓虹 赵松
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 磷酸丙糖异构酶 NP30-(CDR3)e 多价DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 166-171
• 页数: 7页
• 分类号: R383.24
• 字数: 5113字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2005.03.002

摘要

目的构建含日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(TPI)基因和日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30 H链CDR3区6倍重复表位基因(CDR3)6的多价DNA疫苗,并观察该融合基因在真核细胞中表达.方法设计合成连接肽(G1y4Ser)3基因的两条互补单链,退火成双链后克隆到真核表达载体pcDNA3.1,改建为pcDNA3.1-linker.分别将SjCTPI DNA片段及NP30的(CDR3)6DNA片段克隆到连接肽的上游或下游,构建pcDNA3.1-TPI-1inker-(CDR3)6和pcD-NA3.1-(CDR3)6-linker-TPI2种多价疫苗.设计引物分别扩增TPI-1inker-(CDR3)6和(CDR3)6-linker-TPI,再分别插入真核表达载体pEGFP-N1多克隆位点,绿色荧光蛋白基因的上游,重组质粒用脂质体导入真核细胞COS-7,观察插入基因在真核细胞的表达.结果经双酶切及测序鉴定证实多价疫苗pcDNA3.1-TPI-linker-(CDR3)6和pcDNA3.1-(CDR3)6-linker-TPI构建成功;构建的pEGFP-N1-TPI-linker-(CDR3)6和pEGFP-N1-(CDR3)6-linker-TPI在导入COS-7细胞后能成功表达.结论日本血吸虫TPI和NP30-(CDR3)6的多价DNA疫苗构建成功,且该融合基因能在真核细胞中表达.