超广谱β-内酰胺酶SHV-5的基因重组表达及酶活性鉴定

• 作者: 凌保东 张效良 张翔 李苌青 谢勇恩
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: blaSHv-5基因 克隆 表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 482-484
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8689.2005.08.010

摘要

目的对blaSHV-5进行基因重组表达,为建立SHV类β-内酰胺酶抑制剂筛选模型研究奠定基础.方法以产blaSHV-5肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板,自行设计一对寡核苷酸引物,通过PCR扩增获得blaSHV-5基因片断,定向克隆入质粒载体pBK-CMV构建重组质粒,对重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序鉴定,重组质粒转化大肠埃希菌XL1-Blue MRF'后,Nitrocefin显色结合SDS-PAGE分析目的基因在大肠埃希菌中的表达及其酶活性.结果PCR扩增获得了大小约为900bp的DNA条带,定向克隆入质粒载体pBK-CMV后筛选到大小约为5.4kb的重组质粒,Sac I和EcoR I双酶切后可切下大小约900bp的插入片段,DNA测序发现插入片断的基因序列与GenBank中肺炎克雷伯菌基因序列完全一致,重组质粒转化大肠埃希菌XL1-Blue MRF′后可表达分子量约为31500的重组蛋白.重组菌裂解液对nitrocefin显示出较强水解活性.结论超广谱β-内酰胺酶SHV-5在大肠埃希菌XL1-Blue MRF′中实现了基因重组表达.为进一步进行酶的纯化等相关后续研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	凌保东		74	681	13.0	23.0
2	张翔		43	175	8.0	10.0
3	谢勇恩		35	94	6.0	7.0
4	张效良		6	12	2.0	3.0
5	李苌青		4	21	3.0	4.0