人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库的构建及鉴定

• 作者: 周红娟 姚航平 朱海红 陈峰 陈晓红 陈智
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 基因文库 遗传技术 乙型肝炎肝硬化 肝组织 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 98-103
• 页数: 6页
• 分类号: R512.62
• 字数: 4837字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.02.002

摘要

目的:构建人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定基础.方法:用Trizol方法提取人乙型肝炎肝硬化组织总RNA,并用mRNA纯化试剂盒进行mRNA纯化;反转录合成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K水解、纯化后,用Sfi I酶切;将酶切产物进行分级分离,回收0.4 kb以上的cDNA组分,并与λTripl Ex2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;鉴定文库的滴度和重组效率后,进行文库扩增;鉴定扩增文库的滴度和重组效率;随机挑取11个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量.结果:未扩增文库滴度为1.03×106 pfu/ml,重组效率为97.24%,扩增后文库滴度为1.36×109 pfu/ml,重组效率为99.02%;用载体两端的通用引物进行PCR鉴定,插入片段平均长度为1.02 kb,含1 kb以上的占36.36%,0.5～1 kb的占63.64%.结论:已成功构建一高质量的人乙型肝炎肝硬化组织cDNA文库,为筛查与乙型肝炎肝硬化的发生特异相关的基因及探讨乙型肝炎肝硬化的发病机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈智	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	162	1080	15.0	27.0
2	朱海红	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	28	165	6.0	11.0
3	姚航平	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	94	547	12.0	17.0
4	陈峰	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	79	415	12.0	17.0
5	陈晓红	浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所	10	25	3.0	5.0
6	周红娟	浙江大学医学院基础医学部	1	8	1.0	1.0