成年大鼠非胰岛内Nestin阳性细胞的体外分离、培养及分化

• 作者: 介建政 孙立波 张德恒 张海燕 李卫红 田井琦 白日星
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 干细胞 胰腺 胰
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 275-277,298
• 页数: 5页
• 分类号: Q945.6-33
• 字数: 3205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-587X.2005.02.034

摘要

目的:建立成年大鼠胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞的体外分离培养及分化的方法.方法:采用胰管内注入胶原酶消化法分离3只成年大鼠胰腺组织,并经含10%胎牛血清RPMI 1640液(pH 7.6)体外培养,36 h后弃去悬浮细胞及胰岛,改用无10%胎牛血清RPMI 1640液(pH 7.4)加bFGF、EGF及N2添加剂培养,18～22 d后收集新生类胰岛样细胞团并传代培养.挑选新分离的胰岛和新生类胰岛样细胞团每次各40个,共3次,采用131 I放射免疫法测定分离的胰岛及新生类胰岛样细胞团的胰岛素分泌量,并计算葡萄糖刺激指数(SI);免疫荧光细胞化学法检查贴壁细胞及传代后的新生类胰岛样细胞团Nestin阳性细胞的表达.结果:胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛;分离后胰腺组织在pH 7.6的10%胎牛血清RPMI 1640液培养条件下,36 h内胰岛细胞不贴壁,贴壁细胞中大多数表达Nestin阳性细胞,无胰岛素和胰高血糖素表达,但Nestin表达不一,培养18～22 d可见新生类胰岛样细胞团出现,新生类胰岛样细胞团传代后仍可见Nestin阳性细胞.新分离的40个胰岛在含糖3.3、16.7 mmol·L-1培养液中胰岛素分泌量为(63.6±4.0)、(202.2±14.8)mIU·L-1;而新生的40个类胰岛样细胞团胰岛素分泌量为(3.5±0.2)、(3.3±0.2)mIU·L-1,差异有显著性(P＜0.001).结论:胰管内注入胶原酶消化法可获得功能、形态良好的胰岛;在pH 7.6条件下可分离培养出成年大鼠胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞,经无血清培养形成的类胰岛样细胞团,可传代培养,并表达胰岛素.胰腺非胰岛内Nestin阳性细胞具有胰腺干细胞特点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张德恒	吉林大学中日联谊医院基本外科	76	598	15.0	21.0
2	李卫红	首都医科大学细胞生物学教研室	74	368	10.0	15.0
3	孙立波	吉林大学中日联谊医院基本外科	63	457	13.0	19.0
4	张海燕	首都医科大学细胞生物学教研室	127	603	12.0	18.0
5	白日星	首都医科大学北京天坛医院基本外科	45	163	8.0	10.0
6	介建政	吉林大学中日联谊医院基本外科	5	15	2.0	3.0
7	田井琦	浙江省绍兴市人民医院肿瘤科	6	10	2.0	3.0