问号钩端螺旋体主要外膜蛋白免疫功能表位及其致炎作用的研究

• 作者: 严杰 徐丽慧 毛亚飞 阮萍
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体,问号/致病力 细菌外膜蛋白/致病力 免疫显性表位/分析 细胞因子
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 9-14
• 页数: 6页
• 分类号: R377|R514.4
• 字数: 3475字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.003

摘要

目的:了解问号钩端螺旋体(简称钩体)主要外膜蛋白OmpL1、LipL32和LipL41免疫功能表位及其致炎作用.方法:建立Ni-NTA亲和层析法,提取不同基因型表达的目的重组蛋白rOmpL1/1和OmpL1/2、LipL32/1和rLipL32/2、LipL41/1和rLipL41/2.采用SDS-PAGE检测上述目的重组蛋白的表达情况和提取物纯度.分别采用Signal P3.0预测服务器Signal P-NN软件、Propred MHC class-Ⅱ binding peptide prediction-ProPred预测服务器EMBOSS软件,对上述蛋白的信号肽、MHC-Ⅱ类分子结合肽和B细胞表位进行分析.以人脐静脉内皮细胞株EVC-304为效应细胞,采用ELISA检测上述目的重组蛋白诱导人脐静脉内皮细胞EVC-304分泌IL-1、IL-8和TNF-α的作用.结果:在IPTG诱导下,所构建的原核表达系统可有效表达rOmpL1/1和rOmpL1/2、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2,其产量分别约占细菌总蛋白的30%和15%、40%和35%、15%和10%.提纯后的目的重组蛋白SDS-PAGE后均仅见单一的蛋白条带.OmpL1s、LipL32/1和LipL32/2、LipL41s的信号肽分别位于N端1-24、1-21和1-24、1-24位氨基酸残基.OmpL1s、LipL32s和LipL41s分别有2、2和1个相同的主要MHC-Ⅱ结合肽和B细胞表位,其中OmpL1/2另有1个主要MHC-Ⅱ等位基因结合肽和B细胞表位(59-78).不同浓度的OmpL1s、LipL32s和LipL41s均可明显促进人静脉内皮细胞株EVC-304合成并分泌IL-1α、IL-8和TNF-α(P<0.05).其中IL-1α水平以作用24 h时最高,然后下降;IL-8和TNF-α水平则作用48 h高于24 h.结论:问号钩体ompL1/1、lipL32或lipL41不同基因型的表达产物均存在相似的MHC-Ⅱ类分子结合肽和B细胞表位.rOmpL1/1和OmpL1/2、LipL32/1和rLipL32/2、LipL41/1和rLipL41/2对EVC-304细胞均有直接的致炎作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮萍	绍兴文理学院医学院	24	101	6.0	9.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
3	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
4	徐丽慧	浙江大学医学院病原生物学教研室	7	66	4.0	7.0