应用限制性显示技术制备HCV cDNA诊断基因芯片的初步研究

• 作者: 孙朝晖 张宝 彭翼飞 郑文岭 马文丽
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 限制性显示 分子探针 基因芯片 杂交 诊断
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传学和分子生物学
• 页码范围: 226-230
• 页数: 6页
• 分类号: R394
• 字数: 4894字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.02.015

摘要

制备丙型肝炎病毒(HCV)检测芯片并进行验证、初步检测质量评价.采用限制性显示(Restriction display, RD)技术制备芯片探针,从载体pCV-J4L6S中切出HCV全长cDNA,Sau3AⅠ酶消化,所得的限制性片段进行RD-PCR扩增,经聚丙烯酰胺电泳(PAGE)结合银染法进行分离.切胶回收后作3次PCR,得到较纯净的HCV cDNA限制性片段.扩增后的产物克隆至pMD18-T载体进行快速鉴定.将筛选出的限制性片段打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片进行杂交验证分析,对芯片检测进行优化、初步的质量评估.运用RD技术,得到24个200～800bp、大小均一的基因片段,序列分析表明,均属于HCV特异基因,可以作为诊断芯片探针;杂交、测序结果显示,芯片检测的敏感性、特异性、准确度、重复性、线性等指标均佳.利用RD技术制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法;制备的诊断芯片可以用于检测HCV RNA,具有敏感、检测结果较为可靠的优点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑文岭	广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所	200	1451	18.0	26.0
2	孙朝晖	南方医科大学基因工程研究所	99	504	11.0	18.0
4	马文丽	南方医科大学基因工程研究所	275	1255	15.0	23.0
5	彭翼飞	南方医科大学基因工程研究所	22	56	4.0	6.0
6	张宝	南方医科大学基因工程研究所	60	148	7.0	8.0