快速检测细菌并革兰分型的半巢式聚合酶链反应及其初步应用

• 作者: 汤伟 汪晓莺 褚少鹏 马国光
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 半巢式聚合酶链反应 16SrRNA基因 细菌培养
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 164-168
• 页数: 5页
• 分类号: R378
• 字数: 4169字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.02.019

摘要

目的以半巢式聚合酶链反应(PCR)检测细菌及作革兰阴、阳性分型,并与细菌培养法比较.方法以细菌16S rRNA基因为靶序列,采用一对通用引物(pm1, pm3)和一条革兰阴性型特异性引物(pm2),以半巢式PCR方法扩增实验室保留菌株的DNA并作出革兰染色分型;以人类外周血白细胞基因组DNA、HBV-DNA阳性血清以及白假丝酵母菌为对照,检测此方法的特异性;采用倍比稀释菌液作敏感性实验;与细菌培养法比较,验证此方法检测临床标本的敏感性. 结果对17个实验室保留菌株进行检测,以通用引物对作第1次PCR均得到371 bp长度的DNA片段;再以革兰阴性菌特异引物对(pm2, pm3)作第2次PCR,9种阴性菌均得到353bp的DNA片段,而8种阳性菌未被扩增.特异性实验表明,此通用引物与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应.敏感性实验表明,采用半巢式PCR可检测出3个CFU的细菌.对120份临床标本检测,半巢式PCR检测阳性率(29.2%)显著高于细菌培养法检测阳性率(17.5%). 结论此半巢式PCR检测细菌方法,具有特异、敏感、快速的特点,并能对细菌进行革兰阴性、阳性分型,可用于临床感染性疾病的初步诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪晓莺	南通医学院微生物学与免疫学教研室	14	98	5.0	9.0
2	汤伟	南通医学院附属医院感染科	12	91	5.0	9.0
3	马国光	南通医学院微生物学与免疫学教研室	2	21	2.0	2.0
4	褚少鹏	南通医学院附属医院感染科	1	4	1.0	1.0