重组大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位的表达、纯化及黏膜佐剂活性研究

• 作者: 冯强 吴超 曾韦锟 邹全明 郭桐生 高志刚
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组不耐热肠毒素B亚单位 蛋白表达 佐剂性 黏膜免疫
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 疫苗学
• 页码范围: 307-311
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.04.015

摘要

目的对大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和黏膜佐剂活性分析. 方法应用PCR技术从产肠毒素大肠杆菌基因组中扩增出不耐热肠毒素B基因,将此构建于原核表达载体pET-11C,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,然后采用D(+)-immobilized galactose亲和层析柱对重组蛋白进行纯化.以纯化后重组LTB为佐剂,与幽门螺杆菌重组尿素酶B亚单位蛋白(rUreB)共同口服和滴鼻免疫BALB/c小鼠,分析重组LTB的黏膜佐剂活性. 结果 PCR扩增出390bp LTB基因,与GenBank公布的核苷酸序列的相似性为99.5%.重组LTB蛋白的表达率为6%,以胞周质分泌形式表达,经亲和层析后蛋白纯度大于95%.该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性和良好的免疫原性及免疫反应性.动物试验表明,重组LTB与rUreB抗原共同口服和滴鼻免疫小鼠后的特异性血清IgG及鼻腔、气管、胃黏膜和小肠黏膜sIgA水平显著高于单独rUreB抗原免疫组(P<0.05). 结论所获得的重组LTB具有较好的黏膜佐剂活性,为其在黏膜疫苗中的应用奠定基础.