融合6个组氨酸的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在家蚕幼虫中的表达

• 来源期刊: 浙江大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: hGM-CSF 家蚕杆状病毒表达系统 融合表达
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 页码范围: 613-616
• 页数: 4页
• 分类号: Q819
• 字数: 2722字
• 语种: 中文

摘要

将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒BmBacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBacPAKHis-GMCSF.用重组病毒感染家蚕五龄起蚕,分别在24、48、72、96、120 h和144 h剪腹足取蚕血淋巴,ELISA法测得rhGM-CSF融合蛋白在120 h的蚕血淋巴中表达量最高,约为15μg/mL蚕血淋巴.融合蛋白通过Poly-His Protein Purification Kit纯化.SDS-PAGE和Western blotting分析表明,表达产物是3种糖基化程度不同的,分子量分别约为18、20、31 kD的蛋白质.