问号钩端螺旋体内化过程中细胞内游离Ca2+水平变化及细胞凋亡

• 作者: 严杰 李立伟 毛亚飞 王焕萍
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 问号钩端螺旋体 黏附 内化 双荧光染色法 胞内游离Ca2+ 浓度 凋亡
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 27-31
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3957字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.01.006

摘要

目的建立观察问号钩端螺旋体(简称钩体)黏附的双荧光染色法,探讨不同毒力钩体对细胞内游离Ca2+水平及细胞凋亡的影响. 方法以问号钩体黄疸出血群赖型56601株和双曲钩体三堡垄群patoc型Patoc Ⅰ株抗血清为一抗、羊抗兔IgG荧光素F(ab)2和罗丹明F(ab)2片段为二抗的双荧光染色法,分别检测56601株和Patoc Ⅰ株钩体对Vero、J774A.1细胞的黏附作用.采用fluo-3/AM胞内Ca2+ 特异荧光标记激光共聚焦技术,检测问号钩体56601株和波摩那群波摩那型56608株、双曲钩体Patoc Ⅰ株作用的J774A.1细胞胞内游离Ca2+水平的变化.采用FITC-annexin Ⅴ/PI荧光标记流式细胞术,检测紫外线灭活前后的56601株钩体诱导Vero和J774A.1细胞凋亡的情况. 结果所建立的双荧光染色法能清晰地观察到强毒力的56601株钩体对Vero和J774A.1细胞的黏附,无毒力的Patoc Ⅰ株钩体则否.正常J774A.1细胞胞内游离Ca2+基础值为(105.0±7.0)%,Patoc Ⅰ株钩体作用细胞的荧光强度变化百分数一直波动于(102.2±5.2)%.56601株钩体感染J774A.1细胞胞内游离Ca2+浓度迅速增高,呈现为双峰型曲线,其荧光强度变化百分数分别为(747.5±35.7)%和(804.6±40.8)%.56608株钩体感染J774A.1细胞胞内游离Ca2+浓度呈现为缓慢的单一坡型升高,其最大荧光强度变化百分数为(402.4±23.6)%,明显小于56601株钩体,差异有统计学意义(P<0.01).紫外线灭活前后56601株钩体作用Vero细胞的凋亡率分别为84.5%和78.2%,J774A.1细胞凋亡率分别为34.5%和30.9%. 结论所建立的双荧光染色法可用于观察钩体的黏附.细胞胞内游离Ca2+水平与所感染的钩体菌株毒力成正相关.有毒力的钩体接触细胞时即可诱导凋亡发生,启动细胞凋亡信号通路的配体分子可能位于钩体表面.