肝细胞癌MAGE-A9基因的克隆、表达及特性鉴定

• 作者: 丁贵鹏 仇镇宁 冯振卿 孙景军 张建平 徐璐 朱进 李玉华 王子露 管晓虹
• 来源期刊: 南京医科大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 黑色素瘤抗原 MAGE-A9 RT-PCR 基因克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 肿瘤学研究
• 页码范围: 476-479,488
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|R73-35+1
• 字数: 3402字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2005.07.013

摘要

目的:扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE-A9(melanoma antigen A9)cDNA,构建原核表达载体,制备抗MAGE-A9单抗,观察其在肝细胞癌中的表达.方法:从人肝癌组织提取总RNA,用RT-PCR从中扩增出MAGE-A9 cDNA,插入载体pMD18-T中,测序正确后,构建重组表达载体pBAD/gⅢ-MAGE-A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达.重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后,制备抗MAGE-A9单抗,免疫组化检测MAGE-A9在肝细胞癌中的表达和定位.结果:获得MAGE-A9cDNA,测序结果与GenBank一致.成功构建表达载体,表达可溶重组蛋白,SDS-PAGE分析其相对分子质量为35kD.获得抗MAGE-A9单抗,MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21%(8/39),主要表达于胞浆,未见肿瘤异质性,统计学分析MAGE-A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性.结论:有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE-A9抗原,且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性,MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点.