戊型肝炎病毒基因Ⅳ型病毒样颗粒的表达和抗原性分析

• 作者: 李天成 柯昌文 武田直和
• 来源期刊: 华南预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,戊型 基因,病毒 抗原抗体反应
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R512.6
• 字数: 3448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-5039.2005.03.001

摘要

目的表达戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅳ型(G4)结构蛋白ORF2 截短的基因片段,观察病毒样颗粒(VLP)的装配情况,对纯化的VLP进行抗原性分析.方法为了制备HEV病毒样颗粒,将结构蛋白ORF2的N末端111个氨基酸残基截掉,然后将112至660共549个氨基酸残基的基因与杆状病毒基因重组,在昆虫细胞Tn5表达.首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western Blotting检测基因是否正确表达,再用超速离心检测是否形成病毒样颗粒,最后用免疫电镜和ELISA分析病毒样颗粒的抗原特异性.结果含有截掉了N末端111个氨基酸残基的HEV G4的ORF2基因的重组杆状病毒感染昆虫细胞Tn5,除了可以表达最初的产物(相对分子质量为58×103的蛋白分子)外,也产生了一些可能经过宿主细胞酶类处理的蛋白分子,相对分子质量分别为57×103、56×103和54×103,并分泌到培养液中.经超速离心和密度梯度离心,电镜观察发现只有54×103的蛋白分子可以自行组装成VLP,颗粒直径为23～24 nm,浮密度为1.285 g/cm3,与HEV G1比较,G4 VLP具有相同的大小和浮密度,但表达量低.G4 VLP与HEV病人血清可以发生抗原抗体反应,用G4 VLP作抗原可以检测HEV的G1、G3、G4型特异性IgM和IgG抗体.结论该研究证实截短的HEV G4的ORF2结构蛋白基因可以在重组杆状病毒表达系统高效表达.形成的VLP具有HEV病毒颗粒类似的抗原活性,可用于制备抗HEV诊断试剂和开发预防用疫苗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柯昌文		154	1211	18.0	26.0
2	李天成		2	2	1.0	1.0
3	武田直和		2	2	1.0	1.0