15-羟二十碳四烯酸下调肺动脉内皮型一氧化氮合酶的活性

• 来源期刊: 生理学报
• 学科: 医学
• 关键词: 15-羟二十碳四烯酸 15-脂氧酶 肺动脉收缩 内皮细胞 内皮型一氧化氮合酶
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 612-618
• 页数: 7页
• 分类号: R363
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0371-0874.2005.05.011

摘要

15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)在低氧性肺血管收缩中起着重要作用,低氧肺动脉高压下调内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS),使一氧化氮(nitric oxide,NO)的产量下降,但目前尚无关于15-HETE与eNOS/NO相互作用研究的报道.我们通过Wistar大鼠肺动脉环张力、牛肺动脉内皮细胞NO产量、总eNOS表达及eNOS磷酸化测定等方法对15-HETE与eNOS/NO的相互作用进行研究.首先分离大鼠肺动脉,分为eNOS抑制剂L-NAME组(0.1 mmol/L)、去血管内皮组与内皮完整组,用15-HETE作用大鼠离体肺动脉环,测定肺动脉张力.结果表明,L-NAME组、去除内皮组与内皮完整组分别比较,15-HETE对血管的收缩作用增强,且都有统计学意义(P＜0.05).培养牛肺动脉内皮细胞,分别用15-HETE、15-脂氧酶(15-lipoxygenase,15-LO)抑制剂[(cinnamyl 3,4-dihydroxy-[alpha]-cyanocinnamate,CDC)和(nordihydroguiairetic acid,NDGA)]处理细胞,通过Greiss方法检测亚硝酸盐含量,间接测定NO产量,与对照组比较,1 μmol/L15-HETE明显降低肺动脉内皮细胞NO水平(P＜0.05),10μmol/LCDC和0.1mmol/LNDGA显著增加NO水平(分别是P＜0.05,P＜0.01);通过Western blot检测不同时间(5,10,15,20,30,60 min)eNOS的表达情况,结果显示,15-HETE的不同作用时间,没有引起eNOS表达的明显不同;用苏氨酸495位点磷酸化eNOS(Thr495)抗体进行免疫沉淀,再用总eNOS抗体和15-LO抗体通过Western blot检测磷酸化型含量,间接测定eNOS活性,结果表明15-HETE增强Thr495磷酸化型eNOS含量.由于Thr495为eNOS抑制性磷酸化位点,因此15-HETE降低eNOS活性.这些数据表明:15-HETE的缩血管作用有eNOS/NO参与,15-HETE可以通过磷酸化Thr495位点降低eNOS活性,并且首次发现磷酸化eNOS(Thr495)和15-LO之间存在蛋白质相互作用.