同源重组法构建多功能农药降解基因工程菌研究

• 作者: 代先祝 孙纪全 文阳 李顺鹏 蒋建东 顾立锋
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 rDNA sacB 基因工程菌 农药降解 生物修复
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 884-891
• 页数: 8页
• 分类号: Q933
• 字数: 5965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.06.006

摘要

构建遗传稳定的多功能农药降解基因工程菌可以为农药污染的生物修复提供良好的菌种资源,然而,构建遗传稳定且不带入外源抗性的基因工程菌是一个难点.通过以受体菌的16S rDNA为同源重组指导序列、sacB基因为双交换正筛选标记构建同源重组载体,二亲结合的方法将甲基对硫磷水解酶基因(mpd)整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp.CDS-1染色体的16S rDNA位点,分别成功构建了含1个和2个mpd基因插入到rDNA位点且不带入外源抗性的基因工程菌株CDS-mpd和CDS-2mpd.同源重组单交换的效率为3.7×10-7 ～6.8×10-7.通过PCR和Southern杂交的方法验证了同源重组事件.基因工程菌遗传稳定,能同时降解甲基对硫磷和呋喃丹.甲基对硫磷水解酶(MPH)的比活在各生长时期均高于原始出发菌株,比活最高达6.22 mu/μg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	代先祝	南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室	9	229	8.0	9.0
2	孙纪全	南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室	7	172	7.0	7.0
3	蒋建东	南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室	19	520	10.0	19.0
4	顾立锋	南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室	9	282	9.0	9.0
5	文阳	南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室	2	54	2.0	2.0