Aβ1-15多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果

• 作者: 姚志彬 张革 李国营 林贤 汪华侨 袁群芳 邹俊涛
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: β-淀粉样蛋白 B细胞表位 DNA疫苗 体液免疫
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 371-376
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5209字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2005.04.004

摘要

[目的]构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果.[方法]基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgG κ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Western blot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合.[结果]测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8 ku的分泌型4×Aβ15蛋白.pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1:6 400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和.[结论]所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件.