RNAi阻断NPM-ALK基因表达及对大细胞间变性淋巴瘤细胞的影响

• 作者: 叶启东 赵艳霞 赵金彩 顾龙君
• 来源期刊: 中国当代儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 siRNA 融合基因 NPM-ALK 大细胞间变性淋巴瘤
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 英文论著
• 页码范围: 202-206
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8830.2005.03.003

摘要

目的应用RNA干扰技术抑制大细胞间变性淋巴瘤细胞系(Karpas299)中NPM-ALK融合基因表达,观察其对肿瘤细胞生长的影响.方法针对NPM-ALK融合位点设计两个siRNA序列siRNA-I与siRNA-II, 经PCR反应构建含U6启动子siRNA正义和反义线性表达载体,通过脂质体转染Karpas299细胞,应用实时荧光定量RT-PCR、Western blot检测siRNA片段对NPM-ALK mRNA和蛋白表达的抑制作用,MTT、Hoechst荧光染色检测siRNA对肿瘤细胞生长的影响.结果 siRNA-I可导致NPM-ALK mRNA下降约75%(P<0.05),转染72 h后可导致蛋白表达下降;转染siRNA-II细胞NPM-ALK mRNA下降为35%(P<0.05),但蛋白水平无明显改变.转染siRNA-I的细胞可抑制Karpas299细胞的增殖和诱导凋亡发生,siRNA-II则无明显的抑制增殖和诱导凋亡作用.结论含有针对NPM-ALK融合位点特异siRNA序列 的U6表达载体,可特异地抑制NPM-ALK基因mRNA和蛋白的表达,并能抑制大细胞间变性淋巴瘤肿瘤细胞株Karpas299细胞的增殖,导致肿瘤细胞凋亡增加,提示NPM-ALK融合基因的异常表达与大细胞间变性淋巴瘤形成密切相关,为研究NPM-ALK基因功能和大细胞间变性淋巴瘤基因靶向治疗提供了新策略.