人类抗凋亡基因bcl-xL的克隆及其在大鼠心肌细胞内的高效表达

• 作者: 刘启才 华平 廖洪映 张惠忠 殷香保 熊利华 蒙荣森 陈波
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,bcl-xL 克隆 载体构建 心肌细胞 基因疗法
• 年，卷（期）: 2005,（z1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 50-53
• 页数: 4页
• 分类号: R.78|R.363
• 字数: 4716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-3554.2005.z1.021

摘要

[目的]克隆人类抗凋亡基因bcl-xL cDNA,构建两种不同的真核表达载体,评价大鼠心肌细胞表达外源性bcl-xL的效果,并比较不同转染方法对bcl-xL表达的影响.[方法]]RT-PCR法从人肝脏组织获取bcl-xL cDNA,连接至pTargeTTM载体,并亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1上;细菌内同源重组构建重组腺病毒质粒,腺病毒纯化试剂盒获取高滴度的重组腺病毒;脂质体和腺病毒介导分别转染体外培养的大鼠心肌细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测bcl-xL mRNA和bcl-xL蛋白的表达.[结果]获取的bcl-xL cDNA测序正确,成功克隆真核表达质粒pEGFP-bcl-xL;病毒颗粒滴度高达5.3×1012 pfu/L;脂质体和腺病毒转染心肌细胞效率分别为40.3%和95.4%,转染后bcl-xL mRNA和bcl-xL蛋白的表达均增加,但两种方法之间差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]成功获取人类bcl-xZ基因并制备真核表达质粒和重组腺病毒,心肌细胞能高效表达外源性bcl-xL,并以腺病毒介导更为理想.为bcl-xL基因治疗缺血性心脏病提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘启才	广州医学院医学研究中心	83	316	10.0	13.0
2	陈波	中山大学附属第二医院心胸外科	12	197	4.0	12.0
3	华平	中山大学附属第二医院心胸外科	55	281	9.0	11.0
4	张惠忠	中山大学附属第二医院心胸外科	67	473	12.0	17.0
5	廖洪映	中山大学附属第二医院心胸外科	40	219	8.0	12.0
6	殷香保	中山大学附属第二医院医学研究中心	7	54	3.0	7.0
7	蒙荣森	中山大学附属第二医院医学研究中心	9	59	5.0	7.0