运用变性高效液相色谱对肺炎克雷伯菌产ESBL进行基因分型

• 作者: 刘朝晖 叶惠芬 曾军 杨银梅 王汉平 陈劲龙
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 变性高效液相色谱 肺炎克雷伯菌 超广谱β-内酰胺酶 TEM型质粒 基因分型
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 764-767
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3765字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.09.021

摘要

目的通过运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术对前期研究已确认产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌临床分离株TEM型质粒进行基因分型,试图建立一种方便快捷的用于ESBL分子诊断及其流行病学监测的新方法.方法利用PCR技术从肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出TEM型质粒的编码序列,扩增产物运用DHPLC技术进行分析,分析提示,异常的样本通过测序确定其基因突变的类型,最后通过比对确定其基因型.结果共分析了101例肺炎克雷伯菌临床分离株,全部样本均扩增出TEM型质粒的编码序列,经过DHPLC分析,52例(51.4%)样本表现为单一的洗脱峰,其形态与TEM-1标准菌株的峰型相一致,测序确定它们的碱基序列亦相一致,不存在变异,为TEM-1型;49例(48.6%)样本表现为异常的洗脱峰,它们均为双峰,形态一致,但异源双链峰的高度有差异,测序结果表明它们均存在四种相同的基因突变,在NCBI网站比对后确定为TEM-116;测序结果还提示,部分样本中TEM-1和TEM-116混合存在,其比例的不同表现为DHPLC时异源双链峰高度的差异;文献检索表明,本次确定的TEM-116为一新的基因亚型,为国内首次报道.结论DHPLC具有简便快捷、高通量和自动化的特点,重复性好,不仅可对已知突变作出即时诊断,还可发现新的基因亚型,不失为一种较好的ESBL分子诊断方法及其流行病学监测手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝晖		50	426	13.0	18.0
2	陈劲龙		23	233	8.0	15.0
3	叶惠芬		69	850	17.0	25.0
4	杨银梅		49	578	15.0	22.0
5	曾军		50	346	11.0	16.0
6	王汉平		27	124	6.0	10.0