粒-巨噬细胞集落刺激因子与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体构建

• 作者: 朱梅刚 李先茂 李祖国 沈丽佳 赵彤
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 绿色荧光蛋白 慢病毒属
• 年，卷（期）: 2005,（7）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1448-1451
• 页数: 4页
• 分类号: R363
• 字数: 3952字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2005.07.045

摘要

目的:构建粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒载体.方法:采用RT-PCR方法获得GM-CSF全外显子片段,使之克隆到带GFP慢病毒表达载体质粒FUGW中,经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体.在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-GM-CSF导入病毒包装细胞293T,荧光显微镜检测基因的表达,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩,鉴定.用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测转染FUGW-GM-CSF细胞上清液GM-CSF表达水平,电子显微镜观察293T细胞中的慢病毒.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的GM-CSF/PCR产物与GenBank中的数据完全吻合;GM-CSF准确克隆入FUGW的多克隆位点.慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞,荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光.转染FUGW-GM-CSF包装细胞上清液GM-CSF酶联反应阳性.电子显微镜下见慢病毒颗粒位于293T细胞胞浆的内质网中.结论:成功构建了GM-CSF与GFP融合基因慢病毒载体,为诱导DC提供了适合的稳定转染的载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈丽佳	暨南大学医学院	51	243	9.0	11.0
2	赵彤	南方医科大学病理学教研室	75	334	11.0	14.0
3	李先茂	广州中医药大学第一临床医院肿瘤科	1	3	1.0	1.0
4	朱梅刚	南方医科大学病理学教研室	32	149	7.0	10.0
5	李祖国	南方医科大学病理学教研室	29	324	11.0	17.0