应用SYBR GreenⅠ荧光聚合酶链反应检测人类白细胞抗原-B27

• 作者: 关明 张炯 徐黎明 邹和建 陈宇明
• 来源期刊: 中华风湿病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人类白细胞抗原-B27 脊柱炎,强直性 荧光 熔解曲线
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 97-99,插2-2
• 页数: 4页
• 分类号: R593
• 字数: 3905字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1007-7480.2005.02.010

摘要

目的采用SYBR Green Ⅰ荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测人类白细胞抗原-B27(HLA-B27).方法对56例风湿科门诊及住院怀疑为强直性脊柱炎(AS)的患者,以HLA-B27的特异引物和内对照β-Globin引物对标本DNA分别进行常规PCR和SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测,并对HLA-B27阳性DNA进行不同倍数稀释后用两种方法进行检测比较.结果常规PCR检测HLA-B27阳性的样本上具有136 bp的条带,所有的阴性和阳性样本都有268 bp的β-Globin条带,共有30例患者HLA-B27阳性.SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测结果显示,阴性标本的熔解曲线图上(86.3±0.5)℃处有β-Globin的Tm峰,HLA-B27阳性的样本在熔解曲线上有(90.2±0.6)℃HLA-B27的Tm峰.两种方法结果符合率达100%.即使1:100稀释的DNA也可用SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测出结果,而常规PCR只有用原倍DNA才能检测出结果.结论SYBR Green Ⅰ荧光PCR法快速、准确、敏感、实时、简单和环保的特点是常规PCR法所没有的,完全能够替代常规PCR法,成为检测HLA-B27的新手段.