使用hTERT启动子实现肿瘤特异性RNA干扰

• 作者: 李立文 王臻 胡蕴玉 舒茂国 郭晓彤 郭树忠
• 来源期刊: 中国美容医学
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 荧光素酶 骨肉瘤
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 146-148
• 页数: 3页
• 分类号: R738
• 字数: 1896字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-6455.2005.02.007

摘要

目的:修饰hTERT核心启动子,构建shRNA表达载体,实现肿瘤特异性RNA干扰.方法:使用人工TATA盒修饰hTERT核心启动子,重建转录起点.将含有修饰后hTERT启动子的MluI/XhoI片段克隆至pGL3-0CP-shLuc的相应酶切位点,获得pGL3-mhTERT-shLuc.设计针对p53的shRNA编码序列,并以XhoI/XbaI克隆至pGL3-mhTERT-shLuc的相应酶切位点之间,获得pGL3-mhTERT-shp53.使用pGL3-mhTERT-shLuc与pGL3-control共转染人骨肉瘤细胞U20S、MG-63和HOS,48h后测定虫荧光素酶活性,计算相对活性.使用pGL3-mhTERT-shp5 3不同的人骨肉瘤细胞,利用Western Blot分析转染前后p53的表达水平.结果:双酶切鉴定和DNA测序证实pGL3-mhTERT-shLuc和pGL3-mhTERT-shp5 3的序列与设计完全一致.pGL3-mhTERT-shLuc与pGL3-control共转染实验发现,在hTERT-U20S细胞虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异,而在hTERT+的MG-63和HOS细胞在转染后虫荧光素酶相对活性显著降低,与对照组相比抑制效率可分别达到69.7%和71.0%.Western Blot分析表明,与转染pGL3-mhTERT相比,使用pGL3-mhTERT-shP53转染MG-63和HOS后可显著抑制p53的表达,而U20S的p53的表达水平与对照组没有明显改变.结论:我们成功使用TATA盒对hTERT核心启动子进行了修饰,利用其构建了shRNA表达载体,并实现了肿瘤特异性RNAi,为进一步提高基于RMi技术的基因治疗方法的安全性奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭树忠	第四军医大学西京医院整形外科	388	3242	24.0	35.0
2	王臻	第四军医大学西京医院全军骨科研究所	252	2049	24.0	31.0
3	胡蕴玉	第四军医大学西京医院全军骨科研究所	264	2346	22.0	29.0
4	李立文	第四军医大学西京医院全军骨科研究所	30	110	5.0	7.0
5	郭晓彤	第四军医大学西京医院肿瘤科	11	55	3.0	7.0
6	舒茂国	第四军医大学西京医院整形外科	33	154	7.0	9.0