高分辨率HLA-DRB基因型分析方法的研究

• 作者: 张波 张运涛 李欣 杨芳 武国军 王禾 白玉杰 薛丽 袁建林 赵锦荣
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HLA抗原 焦磷酸微测序 基因型 器官移植
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 739-742
• 页数: 4页
• 分类号: R6
• 字数: 2657字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:1000-6702.2005.11.006

摘要

目的采用焦磷酸微测序技术,建立一种高通量、高分辨率的HLA-DRB基因型分析新方法,为临床应用提供依据.方法对HLA-DRB外显子2 DNA序列进行同源性分析,设计PCR引物,提取健康人外周血淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增外显子2基因片段,克隆构建含有外显子2的重组质粒pMD/DRB3*02023.扩增产物经链亲和素包被磁珠纯化、变性、分离制备单链DNA测序模板,采用PSQ96焦磷酸测序仪进行实时测序,分析判断HLA-DRB基因型.结果扩增并克隆了HLA-DRB外显子2,焦磷酸微测序结果与克隆质粒常规测序结果比较,测序正确,与HLA数据库基因序列比较,可准确进行HLA-DRB基因型分析.采用重组质粒pMD/DRB3*02023和pMD/DRB1*0405等比例混合模拟杂合子基因型,焦磷酸微测序分析获得预期结果.结论焦磷酸微测序技术应用于HLA-DRB基因型分析具有高分辨率和快速等优点,可有效分析杂合子基因型,该新方法有望应用于器官及骨髓移植的供体/受体筛查.