制备人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因表达的变化

• 作者: 刘延英 刘静 孙晓红 李良 杨慧 赵焕英
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 帕金森病 受体,多巴胺/遗传学 原位杂交 基因 RNA,信使/生物合成
• 年，卷（期）: 2005,（25）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 25-27
• 页数: 4页
• 分类号: R742
• 字数: 4804字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.25.013

摘要

目的:获得单链、杂交结果稳定的人Ⅱ型多巴胺受体基因正义和反义RNA探针,检测人Ⅱ型多巴胺受体在帕金森病大鼠模型中表达的变化.方法:实验于2002-10/2003-06在首都医科大学神经科学研究所内完成.选出2,6,12周帕金森病大鼠模型60只,每组各20只,用来做原位杂交的组织处理;将已制备的pGEM-T-Easy-D2R质粒载体分别经ClaI、XbaI限制性酶切反应得到线形质粒,再分别以T7和SP6聚合酶制备了人Ⅱ型多巴胺受体基因的反义和正义探针,通过斑点杂交检测探针的浓度;将反义和正义探针分别作等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,观察使对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底的最适宜浓度,从而降低内缘性其他多巴胺受体亚型的干扰作用;用制备的最适宜浓度探针分别杂交帕金森病大鼠模型2,6,12周的组织切片,杂交后冲洗,免疫检测及呈色,观察帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体表达.结果:①实验标记的人Ⅱ型多巴胺受体探针属cRNA探针,其特点为单链探针,杂交过程不需变性,可合成最可靠的反义链探针,杂交结果稳定,体外转录合成的cRNA探针长度也比较一致,其浓度分别为150,120 mg/L.②将反义和正义探针分别等梯度稀释,分别与组织切片杂交,强度洗脱后,结果证明25 mg/L浓度最适宜,对照正义链探针没有杂交信号,而反义探针杂交后也无本底.③原位杂交证实,反义探针能够与帕金森病大鼠模型纹状体中Ⅱ型多巴胺受体mRNA杂交.用反义探针标记的细胞中可见蓝色颗粒沉积,.左右半球纹状体中标记细胞数在2周时没有变化,帕金森病大鼠损伤侧和健侧Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达没有明显变化;6周时,损伤侧较健侧表达明显上调,12周时,损伤侧与健侧表达都下降且没有明显差别.结论:实验获得了人Ⅱ型多巴胺受体基因反义和正义cRNA探针,并得出无本底的最适宜浓度;制备的人Ⅱ型多巴胺受体cRNA探针可以检测帕金森病大鼠模型纹状体内Ⅱ型多巴胺受体基因变化情况,并说明了帕金森病大鼠纹状体Ⅱ型多巴胺受体mRNA表达水平随模型日期增长而发生相应变化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧		124	633	13.0	17.0
2	李良	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室	30	128	6.0	10.0
3	赵焕英	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室	55	178	7.0	11.0
4	刘静	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室	153	580	12.0	16.0
5	孙晓红	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室	13	68	5.0	8.0
6	刘延英	首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室	3	9	2.0	3.0