兔骨髓基质干细胞诱导为骨髓源成骨细胞的时间及功能特征

• 作者: 杨成林 毕郑钢 王玉学
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓 干细胞 成骨细胞 碱性磷酸酶 胶原Ⅰ型
• 年，卷（期）: 2005,（46）
• 所属期刊栏目: 骨髓基质干细胞生物学特征研究
• 页码范围: 24-26
• 页数: 4页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5440字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.46.011

摘要

目的:观察经体外培养、扩增后的兔骨髓基质干细胞,应用诱导剂促使其转化为功能活跃的成骨细胞的功能及其时间特征.方法:实验于2004-03/10在为哈尔滨医科大学第一临床医学院实验中心进行.实验动物选择36只日本大耳白兔,均由胫骨髓腔抽取骨髓,每只抽取量为2.0 mL,抗凝,将其加入淋巴细胞分离液,密度梯度离心,取有核细胞层,加入DMEM培养液进行贴壁培养、传代,取生长状态良好的第3代骨髓基质干细胞,以适量的地塞米松、β-甘油磷酸钠和抗坏血酸作为诱导剂进行诱导,使其向成骨细胞转化,并通过倒置相差显微镜、透射电镜分别对细胞的形态、细胞的内部显微结构进行观察,并应用反转录-聚合酶链反应方法检测其分泌的碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原.结果:原代骨髓基质干细胞于24～48 h开始贴壁,细胞形态为长梭形,核小,呈椭圆形,核浆比例小,三四天细胞集落形成,逐渐增大,2周时集落边缘融合,细胞呈单层旋涡状分布,形态均一.传代培养的骨髓基质干细胞于24 h内开始贴壁,均匀生长,体积大,无集落形成,细胞排列规则.骨髓基质干细胞在加入诱导剂3 d后其形态逐渐由长梭形转变为短梭形,1周后变为多角形或鳞片形,其胞体、细胞核和核浆比例逐渐增大;诱导的细胞细胞器不发达,为低分化细胞,突起内见丰富的粗面内质网;在诱导1周后,细胞开始分泌碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原.碱性磷酸酶扩增产物长度为408 bp,Ⅰ型胶原扩增产物长度为206 bp . 结论:兔骨髓基质干细胞在加入诱导剂1周后,细胞开始分泌碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原,并形成钙结节,细胞功能状态良好,说明诱导1周后骨髓基质干细胞已成功向成骨细胞转化,并形成为功能活跃的骨髓源成骨细胞,是与支架材料构建组织工程骨的最佳时机.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毕郑钢	哈尔滨医科大学第一临床医学院骨科	82	320	9.0	13.0
2	王玉学	哈尔滨医科大学第一临床医学院骨科	45	99	6.0	7.0
3	杨成林	哈尔滨医科大学第一临床医学院骨科	50	245	9.0	12.0