骨形成蛋白2重组腺病毒的构建对骨缺损基因治疗的价值

• 作者: 刘碧波 李海峰 杨敏杰 王德利 阮狄克 马巍
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白质类 转染 基因疗法
• 年，卷（期）: 2005,（38）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 172-173
• 页数: 3页
• 分类号: R68
• 字数: 2012字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2005.38.018

摘要

背景:目前,人们利用基因重组技术已经表达出人类基因重组骨形态发生蛋白2,并且在常位和异位成功地诱导出新骨.但由于重组人骨形态发生蛋白2比天然骨形态发生蛋白2的诱导成骨活性较低,且尚未找到十分理想的载体.目的:通过构建骨形成蛋白重组腺病毒,为骨缺损的基因治疗提供可行载体.设计:单一样本实验.单位:西安交通大学第一医院分子生物学实验中心.材料:PACCMV-PLPA质粒,PJM17质粒,293细胞系.方法:实验于2001-09/02-06在西安交通大学第一医院分子生物学实验中心完成.应用反转录-聚合酶链反应法克隆出骨形态发生蛋白质类2全长基因,构建重组腺病毒载体,DNA-磷酸钙共沉法将辅助质粒PJM17转染293细胞,同源重组构建出重组腺病毒.测滴度并用氯化铯梯度离心纯化备用.主要观察指标:①聚合酶链反应产物克隆结果.②PACCMV-BMP2穿梭质粒的鉴定结果.③重组腺病毒的构建结果.结果:①聚合酶链反应产物克隆结果:克隆构建的重组质粒命名为pGEM-T/hBMP2,大小为(3015+1213)bp.琼脂凝胶电泳结果显示实际值与理论值完全一致.②PACCMV-BMP2穿梭质粒的鉴定结果:质粒大小约为10 Kbp,因PACCMV-PLPA质粒多克隆位点属PUC质粒系列,故用EcoRⅠ酶切,可将重组质粒线性化,大小为10 Kbp.而EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切时,可得到8.8 Kbp和1.2 Kbp两个可见片段.③重组腺病毒的构建结果:重组病毒的鉴定应用聚合酶链反应技术,利用BMP2全长特异引物扩增出目的片段1.2 Kbp,与理论值完全一致.结论:骨形态发生蛋白2重组腺病毒的构建成功为骨缺损等疾病的基因治疗奠定了可行的载体基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨敏杰	西安交通大学第一医院骨科	15	197	6.0	14.0
2	马巍	西安交通大学第一医院骨科	60	322	9.0	16.0
3	刘碧波	西安交通大学第一医院骨科	8	46	5.0	6.0
4	阮狄克	解放军海军总医院骨科	31	406	9.0	20.0
5	王德利	解放军海军总医院骨科	10	102	5.0	10.0
6	李海峰	解放军海军总医院骨科	13	193	6.0	13.0